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          深圳市庫貝爾生物科技股份有限公司庫貝爾打造小型全自動生化分析儀品牌

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          生化分析儀

          生化試劑的基本知識

          文章出處:網責任編輯:作者:人氣:-發表時間:2017-12-26 09:31:00

          深圳庫貝爾生物自主研發生產55項生化試劑,包括腎功、肝功、特種蛋白、血脂、心肌、胰腺、電解質及無機離子類、風濕類、糖代謝類試劑,歡迎致電咨詢400-834-4188、400-635-0600

          一、生化試劑的分類

          (一)按照化學性質分類

          1. 酶類:包括ALT,AST,ALP,ACP,r-GT,α-HBDH,LDH,CK,CK-MB,α-AMY,MSO,ADA,ChE等。

          2.底物/代謝產物類:包括TG,TC,HDL-C,LDL-C,UA,UREA,Cr,Glu,TP,Alb,T-Bil,TBA,NH4+,CO2等。

          3.無機離子類:包括Ca,P,Mg,Cl等。

          4.特種蛋白類:包括apoAl,apoB,Lp(a),C3,C4,PFB(B因子),IgG,IgA,IgM等。

          (二) 按照臨床應用分類

          1.無機離子:包括Ca,P,Mg,Cl等。

          2. 肝功能:包括ALT,AST,r-GT,ALP,MSO,T-Bil,D-Bil,TBA,TP,Alb等。

          3.腎功能:UA,UREA,Cr等。

          4.心肌酶譜:CK,CK-MB,LDH,α-HBDH,AST,MSO。

          5. 糖尿?。?/span>GLU等。

          6.前列腺疾?。?/span>ACP,p-ACP等。

          7.胰腺炎:α-AMY。

          8.血脂:TC,TG,HDL-C,LDL-C,apoA1,apoB,Lp(a)。

          9.痛風:UA。

          10.有機磷中毒:ChE。

          11.免疫性疾?。?/span>C3,C4,PFB(B因子),IgG,IgA,IgM,Kappa鏈,Lambda鏈。

          二、反應速度特性

          按照反應速度,可以分為終點法試劑和動力學試劑。而動力學試劑又可再分為零級動力學法和一級動力學法。

          (一) 終點法試劑

          終點法,指經過一段時間(一般為幾分鐘)的反應,反應進行到完全,使全部底物(被測物)轉變成產物,稱終點法,更確切地說應稱平衡法,這是最理想的分析類型。如圖(1)。

          整個反應達到平衡,由于正向反應的平衡常數很大,可認為所有的被測定物已轉變為產物,反應液的吸光度不再增加(或降低),吸光度的增加(或降低)程度與被測定物的濃度成正比。

          終點法對反應條件(如酶量、pH、溫度)小的改變不敏感,只要這種改變不影響在一定時間內反應達到平衡即可,是最理想的反應模型。


          圖(1

          屬于終點法的試劑主要有:

          TG,TC,HDL-C,LDL-C,UA,Glu,TP,Alb,T-Bil,D-Bil,Cr(氧化酶法),NH4+,CO2 , Ca,P,Mg,Cl , apoA1,apoB,Lp(a),C3,C4,PFB(B因子),IgG,IgA,IgM等。

          (二)動力學法試劑

          1.零級動力學法

          零級動力學法,指反應過程中反應速度維持不變,達到最大,與底物濃度無關,因此,在整個反應過程中,反應物可以勻速地生成某個產物,導致被測定溶液在某一波長下吸光度均勻地減小或增加,減小或增加的速度(△A/min)與被測物的活性或濃度成正比,主要用于酶活性的測定。如圖(2)。

          實際上,由于底物濃度不可能足夠大,隨著反應的進行,底物消耗到一定程度后,反應速度不再維持不變,同樣從啟動反應到達到最大速度需要一定時間。因此,零級動力學法是針對特定時間而言的,各試劑商對這段時間有嚴格規定。


          圖(2

          屬于零級動力學法的試劑主要有:

          ALT,AST,ALP,ACP,r-GT,α-HBDH,LDH,CK,CK-MB,α-AMY,MSO,ADA,ChE,TBA等。

          2.一級動力學法

          在一定的反應時間內,反應速度與底物濃度的一次方成正比,由于底物在不斷的消耗,因此整個反應的速度在不斷的減少,表現為吸光度的增加(或降低)速度越來越小,這類反應達到平衡的時間很長,理論上可以在任意時間段進行監測,但由于血清成份復雜,反應剛啟動時反應較復雜,雜反應較多,經過一段延遲時間才能進入穩定反應期,必需在特定時間段內進行監測,各試劑商對這段時間有嚴格規定。如圖(3)。

          在一固定時間間隔中,底物濃度的變化量正比于底物的初濃度,這是一級反應的同性。該段時間內吸光度的增加或降低與被測物的濃度成正比。

          圖(3

          屬于一級動力學法的試劑主要有:

          Cr(苦味酸法),UREA(紫外監測法)

          三、顯色原理

          顯色系統主要有以下幾種:

          ?  NAD-NADHNADP-NADPH系統

          ?  p-NPp-NA系統

          ?  H2O2偶聯的指示系統

          ?  抗原抗體反應指示系統

          ?  其它顯色反應

          (一)  NAD-NADHNADP-NADPH系統

          NADHNADPH340nm有特征性吸收峰,而NADNADP340nm無特征性吸收峰,利用其偶聯的脫氫酶(工具酶)反應,根據340nm吸光度的變化,可以測定物質的濃度或活性。

          作為該指示系統常用的工具酶有LDH、MDH、GLDHG6PDH

          目前利用此指示系統進行測定的臨床項目有:ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、α-HBDH 、Glu、UREA、NH4+ 、CO2等。

          (二)  p-NPp-NA系統

          p-NPp-NA405nm有特征性吸收峰,根據405nm吸光度的變化,可以測定物質的濃度或活性。

          目前利用此指示系統進行測定的臨床項目有ALP、ACP、r-GT、AMY等。

          (三)  H2O2偶聯的指示系統

          H2O2在過氧化物酶的作用下,可使單一個或成對的無色的色素原氧化成有色的色素,導致某一波長吸光度的增加,因此可用來測定物質的濃度或活性

          用于此指示系統的單一色素原有TMB、ABTS等;成對色素原有酚和4AA、MBTHDMA等。

          目前利用此指示系統進行測定的臨床項目有TC、TG、HDL-C、LDL-C、Glu、Cr、UA等。

          (四)  抗原抗體反應指示系統

          特異性抗體與抗原(待測物質)在相應的緩沖環境下反應生成抗原抗體復合物,形成一定的濁度,導致特定波長透光率的改變。在抗體過剩的前提下,改變程度與抗原濃度成正比。

          目前利用此指示系統進行測定的臨床項目有apoAI、apoB、Lp(a)、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP等。

          (五)其它顯色反應

          蛋白質中的肽鍵在堿性溶液中能與銅離子作用產生紫紅色絡合物,在一定濃度范圍內顏色反應強度與蛋白質的濃度成正比。用于TP的測定。

          溴甲酚綠(BCG)在非離子去污劑Brij35的存在下,可與白蛋白形成緊密結合的綠色復合物。用于Alb的測定。

          重氮苯磺酸鹽與膽紅素生成紅紫色偶氮膽紅素。用于總膽紅素和直接膽紅素的測定。

          甲基麝香草酚蘭(MTB)在堿性條件下可與Ca、Mg形成有色絡合物。用于Ca、Mg的測定。

          四、性能評價方法

          (一)主要性能指標:

          1.穩定性:指在規定條件下經過一段時間的保存,仍能達到相應的性能指標,如試劑空白吸光度、線性范圍、靈敏度等。

          2.反應靈敏度:指單位濃度(或活性)的測定物反應所產生的反應度,反應度越高,靈敏度越大。

          3.精密度:結果間相互符合的一致程度

          4.準確度:與參考測定程序結果的一致性

          5.線性范圍:在規定的重復性和線性偏差下,測得的濃度或活性值與設定的濃度或活性值之間的比例關系的范圍。

          6.基質效應:基質指的是樣品中被分析物以外的組分?;|常常對分析物的分析過程有顯著的干擾,并影響分析結果的準確性。例如,溶液的離子強度會對分析物活度系數有影響,這些影響和干擾被稱為基質效應(matrix effect)。

          7.抗干擾性:

          8.其它:試劑/樣本比例、反應時間、價格等。

          (二)性能評價方法

          1. 穩定性:連續觀測,每日試驗;熱加速試驗。

          2.反應靈敏度:直接計算單位濃度反應物的吸光度變化或變化率。

          3. 精密度:按照NCCLS EP5-A進行。

          4.準確度:按照NCCLS EP9-A2 進行。

          5. 線性范圍:按照NCCLS EP6-A 進行。

          6.基質效應:通過回收試驗確定

          7. 抗干擾性:按照NCCLS EP7-A進行。

           


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